摘要 目的：選用的消毒劑（PROCESS VESPHENE II）能符合藥廠無菌室使用要求而進行該消毒劑的驗證。結果 PROCESS VESPHENE II經實驗室確認和無菌室使用后環境監測結果符合公司標準。
關鍵詞：PROCESS VESPHENE II 消毒劑 驗證
制藥企業潔凈室通常都使用一種以上的消毒劑進行潔凈室消毒。一般在選擇一個消毒劑時，應考慮消毒劑是否能廣譜地殺滅微生物；對人體無害；無腐蝕性，對設備無污染；具有洗滌劑作用；具有穩定性；作用迅速；不因有機物的存在而失去活性；產生所期望的后效作用；廉價。
我公司在進行消毒劑供應商調查過程中發現，奧星公司代理的美GSteris公司生產的消毒劑產品包裝輕巧（單劑量包裝），經γ射線輻射滅菌，適合無菌室清潔消毒使用 ，結合公司實情，選擇了堿性苯酚類清潔消毒劑（PROCESS VESPHENE II）產品進行驗證。
1. 實驗室確認
2. 1.1目的
消毒劑驗證shou先是在實驗室進行對代表細菌的有效殺滅情況進行確認，符合要求后用于潔凈區域清潔，作環境驗證。本方法通過特定的微生物與待確認的消毒劑（使用濃度下）接觸后，對微生物進行培養、計數，考察消毒劑的效果。
1. 2實驗用具
2. 1.2.1 指示菌種
金黃色葡萄球菌
白色念珠球菌
1.2.2 SCD預制培養基平板 用于細菌培養計數
按照SCD干粉培養基配制說明書制備，保存。
1.2.3 TSB液體培養基 用于細菌增殖培養
按照TSB干粉培養基配制說明書制備，保存。
1.2.4 無菌具塞試驗管（15ml）
1.2.5 MILIPORE微生物限度試驗過濾裝置
1.2.6 無菌純化水
MILI-Q超純水于121℃，15分鐘滅菌后冷卻備用。
1.2.7 無菌生理鹽水
0.9g氯化鈉溶于100ml的MILI-Q超純水，于121℃，15分鐘滅菌后冷卻備用。
1.3 待驗證消毒劑（ PROCESS VESPHENE II）
1.3.1待驗證消毒劑的配制
PROCESS VESPHENE II（1：128稀釋）：吸取該消毒劑2毫升，用無菌純化水稀釋**256毫升。然后分注10ml于無菌具塞試驗管，共分注15管備用。
1.3.2 指示菌增殖培養物
取金黃色葡萄球菌、白色念珠球菌分別接種于TSB液體培養基，于23.5℃培養24-48小時即得，培養后微生物濃度應不少于106個/ml。
1.3.3 驗證用消毒劑的配制和準備工作
按使用濃度稀釋消毒劑**500ml。
取10ml稀釋后的消毒劑分注于無菌具塞試驗管。每種試驗用微生物試驗管分"5分鐘組"、"10分鐘組"和"15分鐘組"共3組，每組2支。
1.4 試驗步驟（接種金黃色葡萄球菌）
1.4.1微生物的接種
取金黃色葡萄球菌增殖培養物0.2ml，分別接種于上述3組共6支盛有待驗證消毒劑的無菌具塞培養管，輕輕搖動，混合均勻，并立即開始計時。
1.4.2 過濾
5分鐘后取上述"5分鐘組"的接種細菌的消毒液，傾入過濾杯濾過；然后各用無菌生理鹽水50ml清洗濾膜，濾過，重復3次。同組另一支同上操作。
1.4.3 "10分鐘組"和"15分鐘組"的操作
消毒劑與細菌培養物懸浮液混合10分鐘后、15分鐘后，重復4.2**4.3的操作。
1.4.4 培養和計數
取下濾膜放入SCD預制培養基平板，含菌膜面向上。
于32.5℃的恒溫箱內培養7天。
7天后在明亮處，對平板上的菌落數進行計數。
1.4.5 陽性對照
取金黃色葡萄球菌增殖培養物0.2ml于濾杯內，加無菌純化水進行梯度稀釋**濃度為10~100cfu/ml，取稀釋液體1m于SCD預制培養基平板后，按4.4培養和計數
1.5 接種白色念珠球菌的操作重復步驟4的操作。
1.6 試驗結果
試驗結果見下表1。
表1：PROCESS VESPHENE II消毒劑殺菌效果 單位：cfu/ml
|
時間 |
菌種 |
PROCESS VESPHENE Ⅱ |
|
5分鐘 |
金黃色葡萄球菌 |
0 |
0 |
|
白色念珠球菌 |
0 |
0 |
|
10分鐘 |
金黃色葡萄球菌 |
0 |
0 |
|
白色念珠球菌 |
0 |
0 |
|
15分鐘 |
金黃色葡萄球菌 |
0 |
0 |
|
白色念珠球菌 |
0 |
0 |
|
陽性對照 |
金黃色葡萄球菌 |
培養24小時后即為TNTC |
|
白色念珠球菌 |
培養24小時后即為TNTC |
*備注："TNTC"為細菌太多而無法計數的英文縮寫。#p#分頁標題#e#
1.7 結論
消毒劑PROCESS VESPHENE II按照其產品標簽的標示稀釋濃度進行配置后，在5分鐘時便能有效殺滅105金黃色葡萄球菌和白色念珠球菌。
2 潔凈室使用后的環境驗證
2.1潔凈室空氣凈化系統恢復
確認空氣潔凈級別不同的相鄰房間之間的靜壓差符合GMP對潔凈室管理的要求。
2.2潔凈室清潔
生產車間崗位操作人員，使用滅菌注射用水，按PROCESS VESPHENE II標簽上標示使用濃度稀釋后，按照SOP規定的潔凈室清潔消毒方法，分別擦拭1萬級（包括萬級內的局部100級）、10萬級房間地板、工作臺面和墻面等區域。
2.3清潔后第2日，由品管人員到車間潔凈區域對環境采樣，采樣項目有表面菌、沉降菌和浮游菌數，連續隔日測定，共測定3次。
2.4測定結果
各潔凈區域測定結果見下列表（2、3、4）。
表2.環境監測表面附著菌測定結果 單位：cfu/皿
|
區域 |
潔凈級別 |
平均菌數 |
|
**次 |
第二次 |
第三次 |
|
稱量區 |
100 |
0 |
0 |
0 |
|
10，000 |
3.4 |
2.5 |
8.5 |
|
100，000 |
5 |
6 |
10.5 |
|
配液區 |
10，000 |
0.5 |
1 |
0.3 |
|
100，000 |
7 |
2 |
7 |
|
灌封區 |
100 |
0.4 |
0.6 |
0.2 |
|
10，000 |
2 |
12.5 |
1 |
|
100，000 |
0 |
5 |
4 |
|
洗凈區 |
100，000 |
15.5 |
9 |
19.5 |
表3.環境監測沉降菌測定結果 位：cfu/皿
|
區域 |
潔凈級別 |
平均菌數 |
|
**次 |
第二次 |
第三次 |
|
稱量區 |
100 |
0 |
0 |
0.2 |
|
10，000 |
０ |
0 |
1.4 |
|
100，000 |
１ |
0 |
4.5 |
|
配液區 |
10，000 |
０ |
0 |
0 |
|
100，000 |
０ |
0 |
0 |
|
灌封區 |
100 |
０ |
0.2 |
0 |
|
10，000 |
０.9 |
0.1 |
0 |
|
100，000 |
1 |
4 |
0 |
|
洗凈區 |
100，000 |
0 |
1 |
0.5 |
#p#分頁標題#e#
表4.證環境監測浮游菌測定結果 單位：cfu/m3
|
區域 |
潔凈級別 |
平均菌數 |
|
**次 |
第二次 |
第三次 |
|
稱量區 |
100 |
0 |
1 |
4 |
|
10，000 |
０ |
6 |
0 |
|
100，000 |
50 |
2 |
70 |
|
配液區 |
10，000 |
2 |
2 |
2 |
|
100，000 |
30 |
2 |
0 |
|
灌封區 |
100 |
０ |
0 |
0 |
|
10，000 |
4 |
4 |
4 |
|
100，000 |
80 |
30 |
0 |
|
洗凈區 |
100，000 |
20 |
80 |
30 |
注：采樣量為100級1000升，1萬級500升，10萬級100升。
浮游菌濃度計算公式：（菌落數×1000）/ 采樣量
以上表2、3、4的環境測定結果表明，所監測的潔凈區的微生物均在公司環境質量控制范圍內，各潔凈區符合各自的潔凈級別要求。
3 結論
消毒劑PROCESS VESPHENE II的驗證結果表明，該消毒劑適用于潔凈室常規的清潔消毒，并能用于潔凈室的日常潔凈維護。
